Витамин Е для иммунитета: антиоксидантная защита

Витамин Е для иммунитета: антиоксидантная защита

I. Основы витамина Е: Строение, формы и механизмы действия

Витамин Е – это не один конкретный витамин, а группа из восьми жирорастворимых соединений, тесно связанных структурно и функционально. Эти соединения делятся на две основные категории: токоферолы и токотриенолы. Каждая категория включает в себя четыре формы: альфа (α), бета (β), гамма (γ) и дельта (δ). Различие между токоферолами и токотриенолами заключается в структуре боковой цепи: токоферолы имеют насыщенную фитильную боковую цепь, в то время как токотриенолы обладают ненасыщенной изопреноидной боковой цепью с тремя двойными связями.

A. Химическая структура и изомеры

Молекулярная структура витамина Е характеризуется хроманольным кольцом и гидрофобной боковой цепью. Хроманольное кольцо является ключевым для антиоксидантной активности витамина, поскольку содержит гидроксильную группу, способную отдавать атом водорода для нейтрализации свободных радикалов.

Изомеры α-, β-, γ- и δ-токоферолов и токотриенолов отличаются количеством и положением метильных групп на хроманольном кольце. Например, α-токоферол имеет три метильные группы, β-токоферол – две (в положениях 5 и 8), γ-токоферол – две (в положениях 7 и 8), а δ-токоферол – одну (в положении 8). Эти структурные различия влияют на их биологическую активность и предпочтительное поглощение и метаболизм в организме.

Стереохимия также играет роль. Каждый токоферол и токотриенол существует в виде нескольких стереоизомеров из-за наличия хирального центра. Естественно встречающийся α-токоферол обычно представлен в форме RRR-α-токоферола (также называемого d-α-токоферолом), который обладает наибольшей биологической активностью. Синтетический α-токоферол (dl-α-токоферол) представляет собой смесь восьми стереоизомеров, где только один изомер (RRR) является идентичным природному витамину E.

B. Механизмы антиоксидантного действия

Основным механизмом действия витамина Е является его способность действовать как антиоксидант. Он предотвращает окислительное повреждение, нейтрализуя свободные радикалы, нестабильные молекулы, которые могут повредить клетки, ДНК и липиды.

  1. Прерывание цепных реакций: Витамин Е, особенно α-токоферол, эффективно прерывает цепные реакции перекисного окисления липидов. Этот процесс происходит, когда свободные радикалы атакуют липиды в клеточных мембранах, инициируя каскад реакций, приводящих к повреждению мембран. Витамин Е, расположенный в липидном бислое клеточных мембран, жертвует атом водорода своему фенольному гидроксилу свободному радикалу липидного пероксила (LOO•), образуя относительно стабильный радикал токофероксила (TocO•).

  2. Восстановление радикала токофероксила: Радикал токофероксила сам по себе может быть восстановлен другими антиоксидантами, такими как витамин С (аскорбиновая кислота). Витамин С отдает электрон радикалу токофероксила, регенерируя активный антиоксидантный витамин Е. Этот процесс является частью антиоксидантной сети, в которой различные антиоксиданты работают синергически для защиты клеток от окислительного стресса. Глутатионпероксидаза и коэнзим Q10 также участвуют в восстановлении витамина Е.

  3. Защита от перекисного окисления липидов: Витамин Е особенно важен для защиты полиненасыщенных жирных кислот (ПНЖК) в клеточных мембранах от перекисного окисления. ПНЖК очень восприимчивы к атаке свободных радикалов из-за наличия двойных связей в их молекулярной структуре. Витамин Е, будучи липофильным антиоксидантом, эффективно защищает эти жирные кислоты, предотвращая повреждение клеточных мембран и поддержание их целостности и функциональности.

C. Всасывание, транспорт и метаболизм

Всасывание витамина Е происходит в тонком кишечнике и зависит от нормального функционирования поджелудочной железы и желчевыводящих путей, так как требует эмульгирования жиров.

  1. Всасывание: Витамин Е, содержащийся в пище, эмульгируется в кишечнике с помощью желчных кислот и включается в мицеллы. Эти мицеллы транспортируют витамин Е в энтероциты (клетки слизистой оболочки кишечника).

  2. Транспорт: Внутри энтероцитов витамин Е включается в хиломикроны, крупные липопротеиновые частицы, которые транспортируют жиры и жирорастворимые витамины по лимфатической системе в кровоток.

  3. Распределение: Хиломикроны доставляют витамин Е в печень. В печени α-токоферол преимущественно включается в липопротеины очень низкой плотности (ЛПОНП) и высвобождается в кровоток. Белок-переносчик α-токоферола (α-TTP) в печени играет решающую роль в избирательном включении α-токоферола в ЛПОНП. Альфа-TTP имеет высокое сродство к α-токоферолу и низкое сродство к другим формам витамина Е, что объясняет, почему α-токоферол является преобладающей формой витамина Е в плазме крови и тканях. ЛПОНП транспортируют α-токоферол к другим тканям, где он захватывается клетками посредством различных механизмов, включая липопротеинлипазу и рецептор-опосредованный эндоцитоз.

  4. Метаболизм и выведение: Метаболизм витамина Е происходит в печени посредством ω-гидроксилирования и последующего β-окисления. Метаболиты витамина Е, такие как карбоксиэтилгидроксихроманол (CEHC), выводятся с мочой и желчью. Скорость метаболизма и выведения витамина Е варьируется между разными формами витамина Е. Например, токотриенолы, как правило, метаболизируются и выводятся быстрее, чем токоферолы.

II. Роль витамина Е в иммунной системе

Витамин Е играет многогранную роль в поддержании и модуляции иммунной системы. Он влияет как на врожденный, так и на приобретенный иммунитет, поддерживая функцию иммунных клеток и регулируя воспалительные реакции.

A. Влияние на врожденный иммунитет

Врожденный иммунитет является первой линией защиты организма от патогенов. Он включает в себя клетки, такие как макрофаги, нейтрофилы, натуральные киллеры (NK-клетки) и дендритные клетки, которые быстро реагируют на вторжение микроорганизмов.

  1. Макрофаги: Витамин Е улучшает фагоцитарную активность макрофагов, их способность поглощать и уничтожать патогены. Он также модулирует выработку макрофагами цитокинов, таких как интерлейкин-1β (IL-1β) и фактор некроза опухоли альфа (TNF-α), которые играют ключевую роль в воспалительном ответе. Витамин Е может снижать чрезмерную выработку этих провоспалительных цитокинов, тем самым предотвращая повреждение тканей, вызванное воспалением.

  2. Нейтрофилы: Нейтрофилы – это еще один тип фагоцитарных клеток, которые быстро мигрируют к месту инфекции. Витамин Е повышает хемотаксис нейтрофилов (их способность перемещаться к химическим сигналам, исходящим от места инфекции) и их способность к уничтожению бактерий посредством окислительного взрыва (выброса реактивных кислородных радикалов). Однако важно поддерживать баланс, поскольку чрезмерный окислительный взрыв может привести к повреждению тканей.

  3. NK-клетки: NK-клетки играют решающую роль в уничтожении инфицированных вирусами и опухолевых клеток. Витамин Е повышает цитотоксическую активность NK-клеток, их способность уничтожать целевые клетки. Он также влияет на выработку NK-клетками интерферона-гамма (IFN-γ), цитокина, который активирует другие иммунные клетки и усиливает противовирусный ответ.

  4. Дендритные клетки: Дендритные клетки являются антиген-презентирующими клетками (АПК), которые захватывают антигены (части патогенов) и представляют их Т-лимфоцитам, инициируя адаптивный иммунный ответ. Витамин Е влияет на созревание и функцию дендритных клеток, улучшая их способность представлять антигены Т-лимфоцитам и стимулировать Т-клеточный ответ.

B. Влияние на адаптивный иммунитет

Адаптивный иммунитет характеризуется специфическим распознаванием антигенов и развитием иммунной памяти. Он включает в себя Т-лимфоциты (Т-клетки) и В-лимфоциты (В-клетки), которые работают вместе для уничтожения патогенов и обеспечения долговременного иммунитета.

  1. Т-лимфоциты:

    • T-helpers (CD4+ T-Colls): Витамин Е улучшает пролиферацию и дифференцировку Т-хелперов, которые играют решающую роль в координации иммунного ответа. Он также модулирует выработку цитокинов Т-хелперами. Например, витамин Е может способствовать дифференцировке Т-хелперов в Th1-клетки, которые продуцируют IFN-γ и важны для противовирусного иммунитета, и Th2-клетки, которые продуцируют IL-4 и IL-5 и важны для борьбы с паразитами.
    • Цитотоксические Т-лимфоциты (CD8+ Т-клетки): Витамин Е повышает цитотоксическую активность CD8+ Т-клеток, их способность уничтожать инфицированные вирусами и опухолевые клетки. Он также улучшает пролиферацию CD8+ Т-клеток и их способность продуцировать цитокины, такие как IFN-γ.
    • Регуляторные Т-клетки (Tregs): Tregs играют решающую роль в поддержании иммунного гомеостаза и предотвращении аутоиммунных заболеваний. Витамин Е может влиять на функцию Tregs, способствуя их супрессивной активности и помогая регулировать иммунный ответ.
  2. В-лимфоциты: Витамин Е улучшает пролиферацию и дифференцировку В-лимфоцитов в плазматические клетки, которые продуцируют антитела. Антитела – это белки, которые специфически связываются с антигенами и нейтрализуют патогены или помечают их для уничтожения другими иммунными клетками. Витамин Е также может влиять на класс переключения антител, процесс, посредством которого В-клетки переключаются на выработку различных типов антител (например, IgG, IgA, IgE) в зависимости от типа инфекции.

C. Витамин Е и воспаление

Воспаление – это сложный биологический ответ на инфекцию, травму или раздражение. Хотя воспаление необходимо для защиты организма, чрезмерное или хроническое воспаление может привести к повреждению тканей и различным заболеваниям.

  1. Регулирование цитокинов: Витамин Е модулирует выработку провоспалительных и противовоспалительных цитокинов. Он может снижать выработку провоспалительных цитокинов, таких как IL-1β, TNF-α и IL-6, и повышать выработку противовоспалительных цитокинов, таких как IL-10. Это помогает сбалансировать воспалительный ответ и предотвратить повреждение тканей.

  2. Ингибирование активации NF-κB: NF-κB – это транскрипционный фактор, который играет центральную роль в регулировании экспрессии генов, участвующих в воспалении. Витамин Е может ингибировать активацию NF-κB, тем самым снижая выработку провоспалительных цитокинов и других медиаторов воспаления.

  3. Уменьшение окислительного стресса: Окислительный стресс, вызванный дисбалансом между выработкой свободных радикалов и антиоксидантной защитой, способствует воспалению. Антиоксидантная активность витамина Е помогает уменьшить окислительный стресс, тем самым ослабляя воспалительные реакции.

D. Витамин Е и старение иммунной системы (иммунное старение)

Иммунное старение – это прогрессирующее снижение функции иммунной системы, которое происходит с возрастом. Оно характеризуется снижением функции Т-клеток, снижением выработки антител и повышенной восприимчивостью к инфекциям и аутоиммунным заболеваниям.

  1. Улучшение функции Т-клеток: Витамин Е может улучшить функцию Т-клеток у пожилых людей. Он может повысить пролиферацию Т-клеток, выработку цитокинов и цитотоксическую активность, тем самым восстанавливая иммунный ответ.

  2. Уменьшение окислительного стресса: Окислительный стресс играет роль в иммунном старении. Антиоксидантная активность витамина Е помогает уменьшить окислительный стресс и смягчить негативное воздействие окислительного стресса на функцию иммунных клеток.

  3. Поддержка выработки антител: Витамин Е может поддерживать выработку антител у пожилых людей, повышая пролиферацию и дифференцировку В-лимфоцитов.

III. Источники витамина Е и рекомендуемые нормы потребления

A. Пищевые источники витамина Е

Витамин Е широко распространен в растительных маслах, орехах, семенах и зеленых листовых овощах.

  1. Растительные масла: Самые богатые источники витамина Е – это растительные масла, такие как масло зародышей пшеницы, подсолнечное, сафлоровое и соевое масла.

  2. Орехи и семена: Орехи и семена, такие как миндаль, фундук, арахис, семена подсолнечника и тыквы, также являются хорошими источниками витамина Е.

  3. Зеленые листовые овощи: Зеленые листовые овощи, такие как шпинат, брокколи и мангольд, содержат витамин Е, хотя и в меньших количествах, чем растительные масла и орехи.

  4. Обогащенные продукты: Некоторые продукты, такие как хлопья для завтрака и маргарин, обогащены витамином Е.

B. Рекомендуемые нормы потребления

Рекомендуемая суточная норма потребления (РСНП) витамина Е варьируется в зависимости от возраста, пола и физиологического состояния.

  1. Взрослые: РСНП для взрослых составляет 15 мг (22,4 МЕ) в день α-токоферола.

  2. Дети: РСНП для детей варьируется в зависимости от возраста, начиная с 6 мг (9 МЕ) для младенцев и увеличиваясь до 11 мг (16,4 МЕ) для детей старшего возраста.

  3. Беременные и кормящие женщины: РСНП для беременных женщин составляет 15 мг (22,4 МЕ) в день, а для кормящих женщин – 19 мг (28,4 МЕ) в день.

C. Факторы, влияющие на статус витамина Е

Несколько факторов могут влиять на статус витамина Е в организме, включая диетические факторы, состояние здоровья и генетические факторы.

  1. Диета: Диета с низким содержанием жиров или высоким содержанием полиненасыщенных жирных кислот может увеличить потребность в витамине Е.

  2. Состояние здоровья: Заболевания, влияющие на всасывание жиров, такие как кистозный фиброз, болезнь Крона и целиакия, могут привести к дефициту витамина Е.

  3. Генетические факторы: Генетические варианты, влияющие на метаболизм и транспорт витамина Е, могут влиять на статус витамина Е.

IV. Дефицит витамина Е: причины, симптомы и последствия

Дефицит витамина Е встречается редко у здоровых людей, придерживающихся сбалансированной диеты. Однако определенные группы людей более восприимчивы к дефициту.

A. Причины дефицита витамина Е

  1. Нарушения всасывания жиров: Нарушения, влияющие на всасывание жиров, такие как кистозный фиброз, абеталипопротеинемия и синдром короткой кишки, являются наиболее распространенными причинами дефицита витамина Е.

  2. Преждевременные роды: Недоношенные дети имеют низкие запасы витамина Е и могут подвергаться риску дефицита.

  3. Генетические нарушения: Некоторые генетические нарушения, такие как дефицит белка-переносчика α-токоферола (α-TTP), могут привести к дефициту витамина Е.

  4. Чрезмерное потребление полиненасыщенных жирных кислот: Диета с высоким содержанием полиненасыщенных жирных кислот (ПНЖК) может увеличить потребность в витамине Е, поскольку ПНЖК более восприимчивы к перекисному окислению липидов.

B. Симптомы дефицита витамина Е

  1. Неврологические симптомы: Дефицит витамина Е в первую очередь поражает нервную систему, вызывая такие симптомы, как атаксия (нарушение координации), периферическая невропатия (повреждение нервов), миопатия (мышечная слабость) и ретинопатия (повреждение сетчатки).

  2. Иммунные нарушения: Дефицит витамина Е может нарушить функцию иммунной системы, увеличивая восприимчивость к инфекциям.

  3. Гемолитическая анемия: У младенцев дефицит витамина Е может привести к гемолитической анемии, состоянию, при котором красные кровяные клетки разрушаются быстрее, чем могут быть заменены.

  4. Репродуктивные проблемы: Дефицит витамина Е может повлиять на репродуктивное здоровье, вызывая бесплодие и выкидыши.

C. Последствия дефицит витамина – это

  1. Повышенная восприимчивость к инфекциям: Дефицит витамина Е ослабляет иммунную систему, делая людей более восприимчивыми к бактериальным, вирусным и грибковым инфекциям.

  2. Хронические заболевания: Дефицит витамина Е может способствовать развитию хронических заболеваний, таких как сердечно-сосудистые заболевания, рак и нейродегенеративные заболевания.

  3. Нарушение когнитивной функции: Дефицит витамина Е может ухудшить когнитивную функцию и увеличить риск развития деменции.

V. Передозировка витамином Е: риски и побочные эффекты

В отличие от дефицита, чрезмерное потребление витамина Е также может привести к неблагоприятным последствиям для здоровья. Хотя витамин Е относительно нетоксичен, высокие дозы могут увеличить риск кровотечений и других проблем.

A. Риски передозировки витамином Е

  1. Кровотечения: Высокие дозы витамина Е могут препятствовать свертыванию крови, увеличивая риск кровотечений, особенно у людей, принимающих антикоагулянты, такие как варфарин.

  2. Геморрагический инсульт: Некоторые исследования показывают, что высокие дозы витамина Е могут увеличить риск геморрагического инсульта, типа инсульта, который возникает, когда кровеносный сосуд в головном мозге разрывается и кровоточит.

  3. Взаимодействие с лекарствами: Витамин Е может взаимодействовать с некоторыми лекарствами, такими как антикоагулянты, антиагреганты и лекарства от рака.

  4. Другие побочные эффекты: Высокие дозы витамина Е могут вызывать другие побочные эффекты, такие как тошнота, диарея, усталость и головная боль.

B. Рекомендуемые верхние допустимые уровни потребления (ВДУП)

Институт медицины установил верхний допустимый уровень потребления (ВДУП) витамина Е для предотвращения побочных эффектов.

  1. Взрослые: ВДУП для взрослых составляет 1000 мг (1500 МЕ) в день для α-токоферола из всех источников (пища и добавки).

  2. Дети: ВДУП для детей варьируется в зависимости от возраста, начиная с 300 МЕ для детей 1-3 лет и увеличиваясь до 800 МЕ для подростков 14-18 лет.

VI. Витамин Е и конкретные заболевания

Витамин Е был изучен на предмет его потенциальной роли в профилактике и лечении различных заболеваний.

A. Сердечно-сосудистые заболевания

  1. Антиоксидантная защита: Антиоксидантная активность витамина Е может помочь предотвратить окисление холестерина липопротеинов низкой плотности (ЛПНП), ключевого шага в развитии атеросклероза (образование бляшек в артериях).

  2. Улучшение функции эндотелия: Витамин Е может улучшить функцию эндотелия, внутреннего слоя кровеносных сосудов, который играет решающую роль в регулировании артериального давления и кровотока.

  3. Снижение агрегации тромбоцитов: Витамин Е может снизить агрегацию тромбоцитов, процесс, который способствует образованию тромбов.

Однако результаты клинических исследований по влиянию витамина Е на сердечно-сосудистые заболевания были неоднозначными. Некоторые исследования показали, что добавки витамина Е могут снизить риск сердечно-сосудистых заболеваний, в то время как другие исследования не выявили никакой пользы или даже обнаружили повышенный риск в определенных группах.

Б. Рак

  1. Антиоксидантная защита: Антиоксидантная активность витамина Е может помочь защитить клетки от повреждения ДНК, вызванного свободными радикалами, что может способствовать развитию рака.

  2. Ингибирование роста опухоли: Некоторые исследования показали, что витамин Е может ингибировать рост опухоли и метастазирование в лабораторных условиях и на животных моделях.

  3. Улучшение иммунной функции: Витамин Е может улучшить функцию иммунной системы, помогая организму бороться с раковыми клетками.

Опять же, результаты клинических исследований по влиянию витамина Е на рак были неоднозначными. Некоторые исследования показали, что добавки витамина Е могут снизить риск некоторых видов рака, таких как рак предстательной железы и рак толстой кишки, в то время как другие исследования не выявили никакой пользы или даже обнаружили повышенный риск в определенных группах, например, у курильщиков.

C. Нейродегенеративные заболевания

  1. Антиоксидантная защита: Антиоксидантная активность витамина Е может помочь защитить клетки мозга от повреждения, вызванного свободными радикалами, которые, как считается, играют роль в развитии нейродегенеративных заболеваний, таких как болезнь Альцгеймера и болезнь Паркинсона.

  2. Улучшение когнитивной функции: Некоторые исследования показали, что витамин Е может улучшить когнитивную функцию и замедлить прогрессирование когнитивных нарушений у людей с болезнью Альцгеймера.

  3. Нейропротекторные эффекты: Витамин Е может оказывать нейропротекторные эффекты, защищая нервные клетки от повреждений и гибели.

Как и в случае с сердечно-сосудистыми заболеваниями и раком, результаты клинических исследований по влиянию витамина Е на нейродегенеративные заболевания были неоднозначными. Некоторые исследования показали, что добавки витамина Е могут быть полезны для профилактики и лечения этих заболеваний, в то время как другие исследования не выявили никакой пользы или даже обнаружили повышенный риск в определенных группах.

D. Другие заболевания

Витамин Е также изучался на предмет его потенциальной роли в профилактике и лечении других заболеваний, таких как:

  1. Возрастная дегенерация желтого пятна (ВМД): ВМД – это основная причина слепоты у пожилых людей. Некоторые исследования показали, что добавки витамина Е в сочетании с другими антиоксидантами могут замедлить прогрессирование ВМД.

  2. Диабет: Витамин Е может улучшить контроль уровня сахара в крови и снизить риск осложнений диабета.

  3. Артрит: Витамин Е может уменьшить воспаление и облегчить симптомы артрита.

  4. Болезни печени: Витамин Е может улучшить функцию печени и снизить риск повреждения печени.

VII. Добавки витамина Е: типы, дозировка и безопасность

Добавки витамина Е доступны в различных формах, включая капсулы, таблетки и жидкости. Важно выбирать качественную добавку и соблюдать рекомендуемые дозировки.

A. Типы добавок витамина Е

  1. d-α-токоферол (RRR-α-токоферол): Это натуральная форма витамина Е, которая лучше усваивается организмом, чем синтетическая форма.

  2. dl-α-токоферол (all-rac-α-токоферол): Это синтетическая форма витамина Е, которая менее эффективна, чем натуральная форма.

  3. Токотриенолы: Токотриенолы – это другая форма витамина Е, которая также обладает антиоксидантными свойствами. Некоторые исследования показывают, что токотриенолы могут иметь дополнительные преимущества для здоровья по сравнению с токоферолами.

  4. Смешанные токоферолы: Некоторые добавки содержат смесь различных токоферолов (α, β, γ и δ).

B. Дозировка добавления витамина

Дозировка добавок витамина Е варьируется в зависимости от индивидуальных потребностей и состояния здоровья. Важно проконсультироваться с врачом или диетологом, чтобы определить подходящую дозировку.

  1. Дефицит профилактики: Для профилактики дефицита витамина Е обычно рекомендуется дозировка от 15 до 30 мг (22,4-44,8 МЕ) в день.

  2. Лечение заболеваний: Для лечения определенных заболеваний, таких как сердечно-сосудистые заболевания или рак, могут потребоваться более высокие дозы витамина Е. Однако важно использовать добавки витамина Е под наблюдением врача.

C. Безопасность добавок витамина Е

Добавки витамина Е обычно считаются безопасными при соблюдении рекомендуемых дозировок. Однако высокие дозы витамина Е могут увеличить риск кровотечений и других побочных эффектов. Важно соблюдать осторожность при приеме добавок витамина Е, особенно если вы принимаете антикоагулянты или имеете другие заболевания.

VIII. Синергизм витамина Е с другими антиоксидантами

Витамин Е работает синергически с другими антиоксидантами, такими как витамин С, селен и коэнзим Q10, для защиты клеток от окислительного стресса.

A. Витамин Е и витамин С

Витамин С восстанавливает окисленный витамин Е, регенерируя его активную антиоксидантную форму. Эта взаимодействие между витамином Е и витамином С помогает усилить антиоксидантную защиту организма.

B. Витамин E и селен

Селен является компонентом глутатионпероксидазы, фермента, который помогает нейтрализовать свободные радикалы. Витамин Е и селен работают вместе, чтобы защитить клетки от окислительного стресса.

C. Витамин Е и коэнзим Q10

Коэнзим Q10 является антиоксидантом, который помогает защитить клетки от повреждения, вызванного свободными радикалами. Витамин Е и коэнзим Q10 работают вместе, чтобы усилить антиоксидантную защиту организма и поддерживать здоровье сердца.

IX. Заключение

Витамин Е является важным питательным веществом, которое играет решающую роль в поддержании здоровья иммунной системы и защите клеток от окислительного стресса. Он влияет на врожденный и приобретенный иммунитет, регулирует воспалительные реакции и может смягчить иммунное старение. Адекватное потребление витамина Е через диету и добавки может поддержать оптимальное здоровье иммунной системы и снизить риск хронических заболеваний. Однако важно поддерживать баланс и избегать чрезмерного потребления, чтобы предотвратить потенциальные побочные эффекты. Консультация с врачом или диетологом может помочь определить оптимальную стратегию потребления витамина Е, соответствующую индивидуальным потребностям и состояниям здоровья.

Leave a Reply

Your email address will not be published. Required fields are marked *